分光光度計的使用方法
1.使用儀器前,使用者應(yīng)該首先了解本儀器的結(jié)構(gòu)和工作原理。以及各個操作旋鈕之功能。在未接通電源前,應(yīng)該對儀器的安全性進(jìn)行檢查,電源線接線應(yīng)牢固。通地要良好,各個調(diào)節(jié)旋鈕的起始位置應(yīng)該正確,然后再接通電源開關(guān)。儀器在使用前先檢查一下,放大器暗盒的硅膠干燥筒(在儀器的左側(cè)),如受潮變色,應(yīng)更換干燥的藍(lán)色硅膠或者倒出原硅膠,烘干后再用。 2.將靈敏度旋鈕調(diào)置“1”檔(放大倍率zui?。?。
3.開啟電源,指示燈亮,選擇開關(guān)置于“T”,波長調(diào)至測試用波長。儀器預(yù)熱20分鐘。
4.打開試樣室蓋(光門自動關(guān)閉),調(diào)節(jié)“0”旋鈕,使數(shù)字顯示為“00.0”,蓋上試樣室蓋,將比色皿架置與蒸餾水校正位置,使光電管受光,調(diào)節(jié)透過率“100%”旋鈕,使數(shù)字顯示為“100.0”。
5.如果顯示不到“100.0”,則可適當(dāng)增加微電流放大器的倍率檔數(shù),但盡可能置低倍率檔使用,這樣儀器將有更高的穩(wěn)定性。但改變倍率后必須按(4)重新校正“0”和“100%”。
6.預(yù)熱后,按(4)連續(xù)幾次調(diào)整“0”和“100%”,儀器即可進(jìn)行測定工作。 7.吸光度A的測量按(4)調(diào)整儀器的“00.0”和“100%”,將選擇開關(guān)置于“A”,調(diào)節(jié)吸光度調(diào)零旋鈕,使得數(shù)字顯示為“.000”,然后將被測樣品移入光路,顯示值即為被測樣品的吸光度值。
8.濃度C的測量:選擇開關(guān)由“A”旋置“C”,將已標(biāo)定濃度的樣品放入光路,調(diào)節(jié)濃度旋鈕,使得數(shù)字顯示為標(biāo)定值,將被測樣品放入光路,即可讀出被測樣品的濃度值。
9.如果大幅度改變測試波長時,在調(diào)整“0”和“100%”后稍等片刻,(因光能量變化急劇,光電管受光后響應(yīng)緩慢,需一段光響應(yīng)平衡時間),當(dāng)穩(wěn)定后,重新調(diào)整“0”和“100%”即可工作。
10.每臺儀器所配套的比色皿,不能與其它儀器上的比色皿單個調(diào)換。 11.本儀器數(shù)字表后蓋,有信號輸出0~1000MV,插座1腳為正,2腳為負(fù)接地線。
吸收池(即比色杯)使用注意事項:
② 嚴(yán)禁用手指觸摸透光面,因指紋不易洗凈。嚴(yán)禁用硬紙和布擦拭透光面,只能使用鏡頭紙和綢布。
③ 嚴(yán)禁加熱烘烤。急用干的杯子時,可用酒精蕩洗后用冷風(fēng)吹干。決不可用超聲波清洗器清洗。
④ 吸收池的校正:要固定參比杯和樣品杯,可在杯的毛玻璃面上寫上記號。用盛有參比液的參比杯和樣品杯測定吸光度“A0”,樣品杯換上樣品液后測定的吸光度為“A1”,則校正后的實際吸光度A為:A= A1-A0 1. 分光光度法定義與應(yīng)用
1.1 定義: 分光光度法是利用物質(zhì)所*的吸收光譜來鑒別物質(zhì)或測定其含量的分析檢測技術(shù).
1.2 特點: 靈敏, ,快速和簡便,在復(fù)雜組分系統(tǒng)中,不需要分離,即能檢測出其中所含的極少量物質(zhì).
1.3 應(yīng)用: 生物化學(xué)研究中廣泛使用的方法之一,廣泛用于糖,蛋白質(zhì),核酸,酶等的快速定量檢測.
2. 分光光度計的基本結(jié)構(gòu)和工作原理 2.1 分光光度計的分類 分光光度計的分類
紅外分光光度計: 測定波長范圍為大于760 nm的紅外光區(qū) 可見光分光光度計: 測定波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū) 紫外分光光度計: 測定波長范圍為200~400 nm的紫外光區(qū) 2.2 分光光度計工作原理
人眼可見的光只占電磁波譜的很小—部分(400~760nm),它是一種頻率較大的電磁波.電磁波按頻率大小,從頻率zui小的無線電波到頻率zui大的γ-射線排成一列,即組成電磁波的波譜,如下圖所示. 2.2.1 分光光度計的光譜范圍
包括波長范圍為400~760 nm的可見光區(qū)和波長范圍為200~400 nm的紫外光區(qū).不同的光源都有其*的發(fā)射光譜,因此可采用不同的發(fā)光體作為儀器的光源.
鎢燈的發(fā)射光譜:鎢燈光源所發(fā)出的400~760nm波長的光譜,光通過三棱鏡折射后,可得到由紅,橙,黃,綠,藍(lán),靛,紫組成的連續(xù)色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源.
氫燈的發(fā)射光譜:氫燈能發(fā)出185~400 nm波長的光譜,可作為紫外光光度計的光源.
2.2.2 物質(zhì)的吸收光譜(1)
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